如何设计引物如何设计引物? _经验知识

1、一般是通过设计软件，例如oligo6，primer5等，你可以在网上搜一下引物设计软件下载和使用说明，是比较容易的至于设计引物的一般原则如下序列选取应在基因的保守区段避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对。
2、同时引物设计和选择目的DNA序列区域时可遵循下列原则1 引物长度约为1630bp，太短会降低退火温度影响引物与模板配对，从而使非特异性增高太长则比较浪费，且难以合成2 引物中G+C含量通常为40%60%，可按下式。
3、引物设计原则 1长度1530bp，其有效长度Ln=2G十C十A十T一般不大于38，否则PCR的较适延伸温度会超过Taq酶的较佳作用温度74度，从而降低产物的特异性2G十C含量应在40%一60%之间，PCR扩增中的。

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4、引物设计有 3 条基本原则引物与模板的序列要紧密互补引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应即错配引物设计引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与。
5、引物设计原则序列选取应在基因的保守区段避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对，避免引物自身形成环状发卡结构典型的引物18到24个核苷长引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的。
6、PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列因此，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否要设计引物首先要找到DNA序列的保守区同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构如。

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7、PCR引物设计的11条黄金法则 1引物较好在模板cDNA的保守区内设计 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件比如DNAman比对Alignment，各基因相同的序列。
8、您应该使用巢式PCR来做这个实验无论您是先提RNA再做反转录，还是直接从DNA中获得基因，考虑到模板的复杂性，都应当使用巢式PCR建议您先从目的基因的上下游设计一段引物，即外引物，再根据目的基因上下游设计一段内引物。
【如何设计引物如何设计引物?】9、毫无疑问，oligo的分析功能是较强大的，可惜的是它的自动搜索能力是三者中较弱的Primer premier具有强大的搜索功能，能按照不同的要求设计引物，并给引物打分，但是它对引物的分析功能远比不上oligo强大和全面非常适合。
10、首先查道你的基因序列NCBI搜，第二查引物设计原则，第三下载个引物设计软件设计，简单好用的有primer premier 50，这些都能在网上搜到，软件用法也能搜到。
11、引物设计需要注意的地方很多，在大多数情况下，我们都是在知道已知模板序列时进行PCR扩增的设计的目的是在两个目标间取得平衡扩增特异性和扩增效率引物分析软件将试图通过使用每一引物设计变化的预定值在这两个目标间取得。
12、如何设计引物，扩增目的基因的ORF 无论您是先提RNA再做反转录，还是直接从DNA中获得基因，考虑到模板的复杂性，都应当使用巢式PCR建议您先从目的基因的上下游设计一段引物，即外引物，再根据目的基因上下游设计一段内引物外。
13、提取细胞总RNA然后用试剂盒反转录成cDNA，用cDNA作为模板扩增基因的CDS区，然后想要转染进细胞中比如MYOD1基因，首先在NCBI找到它的mRNA序列，然后找到它的CDS序列，全部***下来，在primer 50 中正向引物直接从CDS的第。

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