由于Elisa的操作步骤复杂,影响反应因素较多,在实验问题中出现了一些大大小小的问题 。然而这些问题也都是可以避免的,熟练掌握之后就会简单的多 。
OD值不正常是什么情况?是什么原因?
1.试剂盒未回温(对应解决方法:试剂盒回温到25℃);2.温度控制不好(对应解决方法:控制正确温度);3.孵育时间不准确(对应解决方法:控制孵育时间);4.洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加(对应解决方法:洗涤4-5次,每孔250ul , 然后拍干);5.阳光直射 , 对着风直接吹(对应解决方法:避风避阳);6.酶标仪的波长错误(对应解决方法:酶标仪的波长450nm);7.抗体的稀释错误(对应解决方法:正确的稀释抗体);8.水质问题(对应解决方法:用矿泉水代替) 。
ELISA检测中OD值很低怎么办第一种情况,整体的OD值偏低
可能情况分析:
1. 标准问题,标准浓度有没有提高的潜力,标准曲线的拟合方式等2. 显色试剂问题 , 显色试剂是否新鲜 , 是否污染3. 检测抗体,检测抗体效价是否OK,保存方法是否合适,稀释液中不含有蛋白质,基质中有影响酶活的物质等4. 体系中是否有其他影响抗原抗体结合的物质5. 孵育条件是否正确6. 洗涤不能过猛 , 洗涤过猛也可能会造成显色偏低
第二种情况,标准曲线OK,样本的OD值很低
情况概述:操作步骤完全按照要求,样本信息也适用,样本类型血清,标曲OK,但就是样本的OD值很低,不在曲线范围内 。
可能情况分析:
1. 一般标曲OK,试剂盒基本没有质量问题,这个时候先去分析样品和保存方法的原因2. 样品是否新鲜,小爱之前看到很多论坛大咖建议用新鲜样品检测,将标准品稀释后加入血清或血浆中检测(也就是血清进一步稀释标准品),观察检测结果,判断是否是血清中有未知物质影响3. 血清中成分复杂 , 标准蛋白的稀释液成分简单,血清中可能有450nm显色物质与板底非特异结合,或者有些非特异结合抗体的蛋白 , 不能洗干净,所以本底比标准样品稀释液高4. 适当延长显色时间5. 更换酶标仪,排除仪器原因6. 联系我们,尝试其他方法
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【Elisa试剂盒OD值不正常的原因 od值是什么】
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